HIS標簽蛋白是一種在分子生物學和生物技術中廣泛使用的標記蛋白。HIS標簽是由6個組氨酸殘基（通常為His6）組成的短肽鏈，常用于通過親和層析技術純化目的蛋白。該標簽具有很強的親和力，可以與某些金屬離子如鎳（Ni²?）或鈷（Co²?）離子結合，從而提供高效、選擇性強的純化手段。HIS標簽的使用大大提高了蛋白純化的效率和便捷性，尤其是在大規模表達和純化重組蛋白時，HIS標簽發揮了重要作用。
核心原理是組氨酸與金屬離子的結合能力。通常，HIS標簽被融合到目標蛋白的N端或C端，在表達過程中，標簽和目標蛋白一起被合成。在進行蛋白純化時，使用裝有金屬離子的親和層析柱（例如Ni-NTA柱），HIS標簽中的組氨酸殘基會與柱中的金屬離子形成配位鍵，從而使帶有HIS標簽的目標蛋白牢牢吸附在柱上。通過洗脫操作，去除未結合的雜蛋白，最終可以通過改變pH值或加入競爭性金屬離子（如Imidazole）來洗脫純化的目標蛋白。
1.高效的純化
HIS標簽在蛋白表達過程中幾乎與目標蛋白同步生成，因此可以通過親和層析高效地分離和純化蛋白。相比傳統的純化方法，HIS標簽純化方法更加簡便且不容易喪失蛋白的活性。
2.選擇性強
通過與特定金屬離子的親和作用，能夠在混合蛋白樣本中選擇性地捕獲目標蛋白，極大地減少了純化過程中的雜蛋白。
3.適用范圍廣
可在多種表達系統中使用，包括大腸桿菌、酵母、昆蟲細胞及哺乳動物細胞等，具有廣泛的適用性。
4.不影響蛋白結構和功能
通常由6個氨基酸（His6）組成，體積小，不會顯著改變目標蛋白的結構與功能。通常情況下，標簽不會對蛋白的折疊和活性產生負面影響，但也有可能在某些特殊情況下對蛋白產生干擾。
5.可以進行進一步的修飾
可通過不同的化學修飾技術進一步修飾，增強其特異性或為后續實驗提供便利。
HIS標簽蛋白的應用：
1.蛋白表達與純化
主要應用是在重組蛋白的表達和純化中。通過構建含有HIS標簽的表達載體，將其轉化到大腸桿菌或其他細胞中進行目標蛋白的高效表達。表達后的蛋白可以通過親和層析方法純化，去除雜蛋白，提高目標蛋白的純度。
2.抗體篩選
還可以作為抗原用于免疫原性研究。通過將含有HIS標簽的蛋白表達后，利用該標簽特異性誘導產生抗-HIS抗體，后續可以利用這些抗體進行蛋白檢測或免疫沉淀等實驗。
3.蛋白交互研究
不僅能幫助蛋白的純化，還能用于研究蛋白間的相互作用。通過共沉淀實驗，研究人員可以借助抗-HIS抗體捕捉與目標蛋白相互作用的其他蛋白，進而了解蛋白的功能。
4.融合蛋白的功能研究
許多研究利用HIS標簽作為一個輔助標簽與其他蛋白進行融合，形成融合蛋白。例如，將酶活性標記物與HIS標簽融合，研究該蛋白在體內的定位與功能。
更新時間：2025-08-15
點擊次數：116
當前位置：
上一個：
返回列表
